【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：游離睪酮測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Free Testosterone ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

試劑盒可用于血清和血漿中游離睪酮的體外定量檢測。

【前言簡介】

睪酮是來自雄性激素中的一種類固醇激素。睪酮主要由男性睪丸和女性的卵巢分泌，有一小部分由腎上腺分泌。它是一種主要的雄性激素和代謝類固醇。此激素對男性和女性的健康發(fā)展起著重要作用。僅小部分

的循環(huán)睪酮（< 1%）以未結(jié)合或游離形式存在。大部分睪酮（約60%）會緊密結(jié)合到SHBG上，而剩余部分則松散的結(jié)合到清蛋白上。結(jié)合清蛋白的睪酮和游離的睪酮都具有生物學(xué)活性，但SHBG則會抑制睪酮的生物活性。睪酮的重要作用是促進男性第二性征的發(fā)育和合成代謝，合成代謝包括肌肉質(zhì)量和強度，骨密度和強度，刺激線性生長和骨的成熟。促進第二性征的發(fā)育包括性器官的成熟。男性睪酮的水平會隨年齡的增加而降低。血清游離睪酮的檢測已經(jīng)被提議為評價生理學(xué)活性激素的一種方式。伴隨多毛癥（可能還會出現(xiàn)多囊卵巢癌）的雄性激素增多的女性血清游離睪酮濃度會增加。另外，在SHBG增加或降低的情況下（如甲狀腺機能低下和肥胖），游離睪酮的檢測比總睪酮的檢測更有效。

【檢測原理】

DRG公司游離睪酮ELISA試劑盒利用的是競爭法原理。包被板的微孔中包被有抗游離睪酮的單克隆抗體，此抗體可以識別睪酮分子上的一個抗原位點。樣品中的內(nèi)源性游離睪酮和辣根過氧酶標(biāo)記的睪酮競爭性的結(jié)合到此上體上。溫育之后，洗板除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。酶標(biāo)物的結(jié)合量與樣品中游離睪酮的濃度成反比。加物液后，所顯示顏色的深度與病人血液樣品中的游離睪酮濃度成反比。血液中的睪酮60%會結(jié)合到SHBG上，一小部分會結(jié)合到其它蛋白上。只有游離睪酮（<1%）的檢測才可以評價激素的生物學(xué)活性。

【試劑盒組成成分】

1) 微孔板：12×8孔  包被有抗睪酮抗體

2) 標(biāo)準(zhǔn)品，6支，1ml ，0、0.2、1、4、20、100pg/ml

3) 酶聯(lián)物，1支，15ml，標(biāo)記辣根過氧酶的睪酮

4) 底物液，1支，15ml，H₂O₂ -TMB 0.26 g/l

5) 終止液，1支，15ml，0.15M的 H₂SO₄ 

6) 質(zhì)控品A/B，2支，1ml 具體濃度見瓶身

7) 洗滌液 ，25ml，2支， 10倍濃縮

所需材料（未提供）

1） 可在450±10nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

1) 移液器

2) 吸水紙

3) 蒸餾水

4) 酶標(biāo)儀（450nm，620-630nm）

【儲存條件】

所有試劑避光儲存在2~8℃環(huán)境下時，未開封的試劑在有效期內(nèi)穩(wěn)定，所以不要使用過期的試劑，開封的試劑都必須儲存在2~8℃的環(huán)境下，包被板必須貯存在2~8℃的環(huán)境下。試劑一旦開封，就必須小心地重新把它密封。

打開后的標(biāo)準(zhǔn)品在2~8℃下密封可保存6個月。

【樣品要求】

我們可以檢測空腹病人的血清睪酮，也可以檢測其血漿睪酮。不要使用溶血、黃疸血、脂血樣品。注意：含疊氮鈉的樣品不可以用于此實驗。如果病人注射了可的松或天然/人工合成的類固醇，那么游離睪酮的檢測結(jié)果將無臨床意義。

血清：

靜脈穿刺法采集全血，待其凝塊，在室溫下用離心機獲取血清。樣品未充分凝集前不要離心，接受了抗凝劑的病人樣品需要更長的凝血時間。

血漿：

將全血樣品收集到含抗凝劑的離心管中，并雜收集后立即離心。

樣品儲存

采血當(dāng)天不使用的樣品，必須冷凍存放在-20℃的環(huán)境下。檢測前，樣品避免反復(fù)凍融。

【檢測方法】

洗滌液

濃縮液用蒸餾水按1:10比例稀釋

稀釋好的洗滌液在2~8℃下30天穩(wěn)定

標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)品使用前需漩渦震蕩5分鐘。

檢測步驟

實驗開始前所有試劑均需平衡至室溫（建議做雙孔檢測）

1) 將所需數(shù)目的板條置于板架上

2) 將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品每份20μl加入到相應(yīng)的微孔中（每次取樣得用新的取樣吸頭），留一個孔做空白對照

3）4）5）6）7）8）9）

特別注意：洗滌過程中，操作正確與否明顯影響檢測的敏感度和精確度。

【結(jié)果計算】

1) 分別計算標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品的平均吸光度值

2) 以吸光度值為Y軸，濃度為X軸，繪制一條平均吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

3) 用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出其相應(yīng)的濃度�？筛鶕�(jù)經(jīng)驗、計算機輔助軟件或其他數(shù)據(jù)分析方法進行計算。

4) 自動方法：計算機用4參數(shù)對數(shù)曲線可獲得良好的檢測結(jié)果。

5) 樣品濃度可直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。游離睪酮濃度高于標(biāo)準(zhǔn)的樣品必須用樣品稀釋液進一步稀釋。濃度計算時，此稀釋因子應(yīng)當(dāng)考慮進去。

更新時間：2024/10/11 16:13:03