人心臟特異性肌鈣蛋白I酶聯(lián)免疫試劑盒
美國cortez 1105Z
預(yù)期使用
此elisa試劑盒可用于人血清中心臟肌鈣蛋白I的定量檢測。肌鈣蛋白I的檢測在急性心肌梗塞疾病的評估中具有重要意義。
前言
肌鈣蛋白是調(diào)節(jié)橫紋肌收縮或抑制的蛋白質(zhì)復(fù)合體。它位于細(xì)絲上以周期與肌肉結(jié)合,包括3個(gè)不同的蛋白質(zhì):肌鈣蛋白I、肌鈣蛋白C和肌鈣蛋白T。同樣地,肌鈣蛋白I存在3個(gè)亞單位:2個(gè)在快骨骼肌亞型和慢骨骼肌亞型,一個(gè)心肌亞型。心肌亞型(cTnI)分子量為22500道爾頓,并有31個(gè)額外的氨基酸殘基,相對兩種骨骼肌亞型約有40%的不同源性。心肌亞型的免疫體不同于兩種骨骼肌亞型,肌鈣蛋白I獨(dú)特的心肌亞型和組織特異性是診斷急性心肌梗塞(AMI)的基礎(chǔ)。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)已經(jīng)被用于急診科胸痛病人的鑒別診斷。當(dāng)血液中敏感和特異性的生物標(biāo)志物如肌鈣蛋白、CK-MB和肌紅蛋白的水平升高,在臨床急性缺血時(shí)診斷為心肌梗死。心肌損傷的標(biāo)志物是心肌肌鈣蛋白(I或T)心肌肌鈣蛋白有心肌組織特異性和高度的靈敏度。同樣地心肌肌鈣蛋白和CK-MB有相似的釋放模式(胸痛開始后4—6h升高)但升高的肌鈣蛋白水平能在血液中保持更長的時(shí)間(6—10天),因此為心肌損傷的檢測提供了更長的窗口期。
正常血液中肌鈣蛋白I的水平非常低,急性心梗(AMI)開始后4—6小時(shí)可在血清中檢測到,12—24小時(shí)濃度達(dá)到峰值。事實(shí)上cTnI在血液中升高的時(shí)間更長,為心肌缺血開始后診斷心肌梗死和圍手術(shù)期血清骨骼肌蛋白升高造成的梗死增加了檢測靈敏度和特異性。
此外,近期數(shù)據(jù)已經(jīng)確定心肌肌鈣蛋白和局部胸部不適后的長期預(yù)后之間的檢測關(guān)系。研究表明,檢測心肌肌鈣蛋白在劃分不穩(wěn)定性心絞痛病人的高風(fēng)險(xiǎn)群體有很高的預(yù)測價(jià)值,并且這些檢測在急診科患者的病情評估上特別有用。
此試劑盒提供了一種快速、靈敏和可靠的定量檢測心肌肌鈣蛋白I的方法?贵w濃度*小1.0ng/ml,且與心臟肌鈣蛋白T或骨骼肌鈣蛋白T或I沒有交叉反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)原理
該試劑盒是基于固相酶聯(lián)免疫吸附檢測試驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)利用4種針對不同抗原決定簇的特異性單克隆抗體。三種的小鼠抗肌鈣蛋白I單克隆抗體于包被孔中。第四種為酶(辣根過氧化物酶)標(biāo)記抗體。實(shí)驗(yàn)樣本同時(shí)與四種抗體反應(yīng),導(dǎo)致肌鈣蛋白I分子如三文治被固相和酶標(biāo)抗體夾著。經(jīng)在室溫90分鐘的溫育,使用蒸餾水洗滌包被孔,去除未結(jié)合的抗體。加入TMB試劑并溫育20分鐘,結(jié)果會(huì)形成藍(lán)色。加入1N的鹽酸終止反應(yīng),并由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。實(shí)驗(yàn)樣本的肌鈣蛋白I濃度與顏色強(qiáng)度成正比。于450nm處檢測吸光度。
試劑盒組成:
1) 包被板:包被板的微孔中包被了抗肌鈣蛋白I的鼠單克隆抗體,96孔
2) 標(biāo)準(zhǔn)品系列:0;2.0;7.5;30;75ng/ml,1.0ml/瓶
3) 酶聯(lián)物:13ml/瓶,內(nèi)含辣根過氧酶標(biāo)記的抗肌鈣蛋白I鼠單克隆抗體、Tris緩沖液和含BSA的防腐劑。
4) TMB底物液:11ml/瓶,內(nèi)含TMB底物液。
5) 終止液:11ml/瓶,內(nèi)含已稀釋好的HCl(1N)。
所需的材料
1、 雙蒸水或者去離子水
2、 移液器:5 μl、10 μl、50 μl、100 μl 和 1.0 ml
3、 一次性的吸嘴
4、 酶標(biāo)儀(450nm)
5、 旋渦混合器
6、 吸水紙
7、 坐標(biāo)紙
8、心臟標(biāo)記物肌鈣蛋白I質(zhì)控品;貨號(hào)為685(Bio-Rad Laboratories Diagnostics Group, Hercules,CA 94547)
試劑貯存條件:
1) 試劑盒不使用時(shí)必須貯存于2-8°C的環(huán)境中,有效期內(nèi)穩(wěn)定。具體效期請見試劑盒標(biāo)簽。
2) 將包被板密封于含干燥劑的包裝袋中,避免接觸潮濕空氣。
試劑準(zhǔn)備:
1實(shí)驗(yàn)前將試劑平衡至室溫。
2用1ml的蒸餾水溶解每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,靜止20分鐘并混勻。溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品在2--8℃下只能保存8小時(shí),重溶超過8小時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)舍去。為了程度的保證已稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性,我們應(yīng)當(dāng)將其分裝凍存于-20℃或更低溫度的環(huán)境下,每份標(biāo)準(zhǔn)品只能凍融一次。
3樣品中肌鈣蛋白I含量可能高于100ng/ml的樣品可用稀釋液稀釋后,再定量檢測。
使用的酶標(biāo)儀帶寬為10nm或者更少,并且在450nm波長檢測的吸光度范圍0—3 OD或者更高是可以接受的。
更新時(shí)間:2024/10/11 16:13:03
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