人淀粉樣前體蛋白β C-末端片段(APPβ CTF)檢測試劑
（日本IBL 27776）
簡介
首例阿爾茨海默病(AD)是由德國神經病理學家于1907年證實,認為是導致癡呆癥的首要原因.眾所周知,淀粉樣蛋白β(老年斑的形成的主要組分)是由淀粉樣前體蛋白(APP,共有三種亞型,APP695,APP751,APP770)經β分泌酶和γ分泌酶裂解形成的.另一方面，β分泌酶C-末端片段(β CTF)經β分泌酶裂解形成而非γ分泌酶
β CTF，Aβ，sAPPα和sAPPβ的檢測在APP代謝途徑研究中有著重要的意義
此試劑盒可檢測細胞裂解液中人APPβ CTF
實驗原理
此試劑盒是一種夾心法的elisa試劑盒，使用了兩種高特異性的抗體。TMB作為顯色劑，*終溶液所顯示的顏色強度與樣品中APPβ CTF的量成正比 檢測范圍
0.19~12pg/mL
預期用途
此試劑盒用于細胞裂解液中人APPβ CTF的檢測
細胞裂解液的準備
1. 細胞培養(yǎng)板內加入IBL裂解液（IBL 裂解液 貨號#19022）
2. 混合器上混勻
3. 2-8℃下旋轉30分鐘使其溶解
4. 2-8℃下10000rpm離心10min
5. 用EIA緩沖液稀釋上清
試劑盒組成
1. 微孔板，96T，包被有抗人APP-C兔IgG
2. 標記抗體濃縮，30X，0.4ml，HRP標記的抗人Aβ(N)(82E1)小鼠IgG單抗
3. 標準品，0.5ml，2支，與人APPβ CTF相應的合成肽
4. EIA緩沖液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
5. 標記抗體稀釋液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
6. 著色劑，TMB，15ml
7. 終止液，1N硫酸，12ml
8. 洗滌緩沖濃縮液，40X，50ml，0.005%吐溫20的磷酸緩沖液
準備步驟
試驗所需材料但試劑盒未提供
1. 酶標儀（450nm）
2. 移液器和槍頭
3. 有刻度的燒杯和量筒
4. 蒸餾水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐標紙（對數-對數）
7. 吸水紙
8. 標準品稀釋管
9. 洗瓶
10. 一次性試驗管
試劑準備
1. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應保存于冰箱內，并于2周內用完
2. 標記抗體的制備：用標記抗體稀釋液將標記抗體稀釋30倍，即得。
例：如果只測一條板，8孔，則需要標記抗體800ul（30ul的標記抗體+870ul的標記抗體稀釋液，混勻，使用時每孔加100ul）
此步驟在實驗前完成
剩余的標記抗體濃縮應裝于密封瓶內，保存在4℃
3. 標準品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標準品瓶內，充分混勻，得到24pmol/L的人APPβ CTF標準品
4. 標準品的稀釋：準備8個試管用于標準品的稀釋，每管加入230ul的EIA緩沖液
更新時間：2024/10/11 16:13:03
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