人瘦素（超敏）酶免試驗檢測試劑
（日本IBL 27775）
簡介
1950年發(fā)現(xiàn)隱性肥胖基因突變導致肥胖，且與二型糖尿病綜合征的病態(tài)肥胖類似。1994年在洛克菲勒大學Freidman團隊發(fā)現(xiàn)肥胖基因編碼形成瘦素。瘦素是由肥胖基因產生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪組織產生瘦素并釋放至血液中，隨著脂肪的累積，血液中瘦素的水平含量也呈增長趨勢。瘦素作為lipostat，隨著脂肪組織內脂肪的沉積而增加；它還可作為一激素，指令大腦終止食物的消化和增加活動；還證明了可用于標記和控制青春期的開始；另外，近期研究表明，瘦素可通過中樞神經系統(tǒng)抑制骨形成。
實驗原理
此試劑盒是一種夾心法的ELISA試劑盒，使用了兩種高特異性的抗體。TMB作為顯色劑，*終溶液所顯示的顏色強度與樣品中瘦素的量成正比
檢測范圍
15.63~1000pg/mL
預期用途
此試劑盒用于人血清，EDTA-血漿和細胞上清中瘦素的定量檢測
重組的和天然的瘦素都可用此試劑盒檢測
試劑盒組成
1. 微孔板，96T，包被有抗人瘦素兔子IgG抗體，親和純化
2. 標記抗體濃縮，30X，0.4ml，HRP標記的抗人瘦素兔IgG Fab片段
3. 標準品，0.5ml，2支，重組人瘦素
4. EIA緩沖液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
5. 標記抗體稀釋液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
6. 著色劑，TMB，15ml
7. 終止液，1N硫酸，12ml
8. 洗滌緩沖濃縮液，40X，50ml，0.005%吐溫20的磷酸緩沖液
準備步驟
試驗所需材料但試劑盒未提供
l 酶標儀（450nm）
l 帶刻度的量筒與燒杯
l 孵箱（37℃±1℃）
l 吸水紙
l 稀釋試管
l 微量移液器和取樣吸頭
l 去離子水
l 坐標紙（log/log）
l 用于稀釋標準品的試管
l 洗滌瓶
試劑準備
1. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應保存于冰箱內，并于2周內用完
2. 標記抗體的制備：用標記抗體稀釋液將標記抗體稀釋30倍，即得。
例：如果只測一條板，8孔，則需要標記抗體800ul（30ul的標記抗體+870ul的標記抗體稀釋液，混勻，使用時每孔加100ul）
此步驟在實驗開始前完成
剩余的標記抗體濃縮應裝于密封瓶內，保存在4℃
3. 標準品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標準品瓶內，充分混勻，得到2000pg/ml的人瘦素標準品
4. 標準品的稀釋：準備8個試管用于標準品的稀釋，每管加入230ul的EIA緩沖液
每管的濃度如下
1號管 1000pg/ml
2號管 500pg/ml
3號管 250pg/ml
4號管 125pg/ml
5號管 62.5pg/ml
6號管 31.25pg/ml
7號管 15.63pg/ml
8號管 0pg/ml（試驗樣品空白）
吸取230ul的標準品于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管，依次連續(xù)稀釋，標準品范圍為1000~15.63pg/ml
5.樣品稀釋：樣品用EIA緩沖液稀釋。如果樣品濃度事先沒有估計，我們建議，先用幾個不同稀釋比例的樣品進行檢測，來確定樣品*佳稀釋比例
更新時間：2024/10/11 16:13:03
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