人淀粉樣蛋白β寡聚體檢測(cè)試劑盒（82E1特異性）
（日本IBL 27725）
簡(jiǎn)介
阿爾茨海默病（AD）是淀粉樣蛋白β（Aβ）肽在腦中積累的神經(jīng)退行性疾病，主要癥狀是認(rèn)知功能下降。一般認(rèn)為凝聚成不溶性纖維（原纖維）的Aβ形成老年斑，這使神經(jīng)元變異并發(fā)展出疾病的癥狀。（這被稱為“淀粉樣蛋白假說”）。
然而，由于作為縮合過程的中間體的可溶性Aβ寡聚體具有強(qiáng)烈的突觸作用傷害作用，“寡聚體假說”現(xiàn)在變得越來越有效，認(rèn)為該疾病由于認(rèn)知功能下降而發(fā)展。據(jù)報(bào)道，當(dāng)從細(xì)胞分泌的或從AD患者腦中提取的Aβ寡聚體被注射到大鼠腦中時(shí)，其引起突觸功能障礙并研究記憶喪失。此外，實(shí)際上也觀察到AD患者的腦內(nèi)Aβ寡聚體與健康個(gè)體相比正在增加。
實(shí)驗(yàn)原理
該試劑盒采用的是固相夾心原理。樣品和酶標(biāo)記抗體的主要反應(yīng)是在U板上進(jìn)行初次溫育，將該溫育的混合物加入到包被板中并進(jìn)行第二次反應(yīng)。洗滌去除未與包被抗體結(jié)合的組分，使用四甲基聯(lián)苯胺（TMB）作為著色劑（色原）。顯色的強(qiáng)度反映了與抗人Aβ（N）（82E1）小鼠單克隆抗體結(jié)合的分子的量，特異性識(shí)別人Aβ的N末端，具有兩個(gè)或更多個(gè)表位。測(cè)量結(jié)果以摩爾濃度計(jì)算，作為Aβ（1-16）上標(biāo)準(zhǔn)化的相對(duì)值。
檢測(cè)范圍
18.98-1215pmol/L
預(yù)期用途
1.該試劑盒可在血清、EDTA-血漿和腦組織提取物中檢測(cè)與兩個(gè)或多個(gè)表位（低聚物，帶有蛋白質(zhì)的聚合物等）的抗人Aβ（N）（82E1）小鼠單克隆抗體結(jié)合的人Aβ分子。
2.由于結(jié)果以Aβ二聚體標(biāo)準(zhǔn)摩爾濃度計(jì)算，與檢測(cè)到的各種分子的重量或數(shù)量不成正比。
試劑盒組成
1. 微孔板，96T，包被有抗人Aβ(N)(82E1)小鼠IgG單抗
2. 標(biāo)記抗體濃縮，30X，0.1ml，HRP標(biāo)記的抗人Aβ(N)（82E1）小鼠IgG 單抗
3. 標(biāo)準(zhǔn)品，0.5ml，2支，人Aβ(1-16)二聚體
4. EIA緩沖液，30ml
5. 標(biāo)記抗體稀釋液，12ml
6. 著色劑，TMB，15ml
7. 終止液，12ml
8. 洗滌緩沖濃縮液，50ml
9. U-板，96孔，用于初次溫育
準(zhǔn)備步驟
試驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 移液器和槍頭
3. 有刻度的燒杯和量筒
4. 去離子水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐標(biāo)紙（對(duì)數(shù)-對(duì)數(shù)）
7. 吸水紙
8. 洗瓶
9. 一次性試驗(yàn)管
試劑準(zhǔn)備
1. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應(yīng)保存于冰箱內(nèi)，并于2周內(nèi)用完
2. 標(biāo)記抗體的制備：用標(biāo)記抗體稀釋液將標(biāo)記抗體稀釋30倍，即得。
例：如果只測(cè)一條板，8孔，則需要標(biāo)記抗體160ul（6ul的標(biāo)記抗體+174ul的標(biāo)記抗體稀釋液，混勻，使用時(shí)每孔加20ul）
此步驟應(yīng)在使用標(biāo)記抗體之前完成。可穩(wěn)定至有效期。
剩余的標(biāo)記抗體濃縮應(yīng)裝于密封瓶?jī)?nèi)，保存在4℃
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標(biāo)準(zhǔn)品瓶?jī)?nèi)，充分混勻，得到2430pmol/L的人Aβ二聚體標(biāo)準(zhǔn)品。本試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)品可以在復(fù)溶后冷凍保存，但是不能重復(fù)凍融。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋在U板上進(jìn)行，如圖（1）所示，標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋使用過U板的一個(gè)板條（A-H），由于我們建議重復(fù)測(cè)量構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，請(qǐng)同時(shí)準(zhǔn)備兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋序列。如：A1-H1和A2-H2.
a. 從A到H的每孔中加入100ul的EIA緩沖液。
b. 向孔A中加入100ul的2430pmol/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，輕輕混勻（約10次）。然后將100ul的混合溶液從A孔加入到B孔中。
c. 用這種方法依次將標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋到孔G。然后，從孔G中取出100ul稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
d. 從A孔到G孔的這7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品系列，從1215pmol/L到18.98pmol/L，孔H是0pmol/L的測(cè)試樣品空白。
更新時(shí)間：2024/10/11 16:13:03
溫馨提示
1.遵守中華人民共和國(guó)有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。
2.請(qǐng)您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對(duì)產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。
總訪問量：555773 管理登錄
