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HMGB1試劑盒(ELISA法)
通用名稱:人高遷移率族蛋白檢測試劑盒(ELISA法)
英文名稱:HMGB1 ELISA
產(chǎn)品規(guī)格:96T
產(chǎn)品貨號:ST51011
產(chǎn)品品牌:德國IBL
HMGB1試劑盒預(yù)期用途
HMGB1試劑盒可用于定量測定人血清和血漿中的HMGB1含量。此外,該試劑盒可用于來自牛,豬,兔,小鼠和大鼠的血清,血漿和腦脊液(CSF)的研究。也可以檢測細胞培養(yǎng)基和BALF(支氣管肺泡液)。
前言簡介
HMGB1是大約30kDa的蛋白質(zhì),是非組蛋白核蛋白組的主要成分。HMGB1(高遷移族Box1蛋白)是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,通常存在于哺乳動物細胞的細胞核和細胞質(zhì)中。
HMGB1在惡性疾病等疾病的發(fā)病機理中起重要作用。在腫瘤的情況下,細胞的氧供應(yīng)可以斷開。 這導致細胞死亡(壞死)和釋放HMGB1,進而導致在相鄰腫瘤環(huán)境中形成朝向腫瘤的血管生成。這些血管確保腫瘤的存活和進一步的生長。
體外研究表明,通過定量測定HMGB1濃度,可以區(qū)分病理性細胞死亡(壞死)和生理細胞死亡(細胞凋亡)。在壞死中觀察到更高的HMGB1值。HMGB1在膿毒性休克后期也起重要作用。 結(jié)果表明,即使在膿毒性休克后期,HMGB1在動物實驗中的抑制顯著提高了嚙齒動物的存活率。HMGB1通過與RAGE(“晚期糖基化終產(chǎn)物的受體”)結(jié)合起作用,具有與細胞因子TNF-α和IL-6相似的促炎作用。 膿毒癥患者血清中也可見高值。血液中的HMGB1濃度在許多其他疾病中也增加,包括類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)急性肺損傷(ALI)和彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)。HMGB1 ELISA由Ikuro Maruyama博士和Shino-Test Corporation(日本)開發(fā)。本產(chǎn)品由Shino-Test公司授權(quán)的IBL制造。
HMGB1試劑盒檢測原理
HMGB1試劑盒是用于定量測定血清和血漿中HMGB1的夾心酶免疫測定。 微量滴定板孔用純化的抗HMGB1抗體包被。樣品中的HMGB1特異性結(jié)合固相的抗體,并被第二個酶標記的抗體識別。底物反應(yīng)后,HMGB1濃度由顏色強度決定。
HMGB1試劑盒組成成分
數(shù)量 | 標簽 | 組成 |
1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板可拆卸,包被有抗HMGB1多克隆抗體 |
1 x | ENZCONJ LYO | 酶標記物 凍干粉含有與過氧化物酶結(jié)合的HMGB1,2 。 |
1 x | CAL LYO | 標準品 凍干粉含有豬HMGB1 ,稀釋見章節(jié)10.1 |
1 x | CONTROL+ LYO | 陽性質(zhì)控 凍干粉含有豬HMGB1 ,稀釋見章節(jié)10.1 |
1 x 20 mL | DILBUF | 稀釋液即用型,含有:緩沖液,0.01 % NaN3. |
1 x 12 mL | ENZCONJ DIL | 酶標記物稀釋液即用型,含有:緩沖液 |
2 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗滌液 5X濃縮含有:磷酸鹽緩沖液,<0.5 %Tween 20. |
1 x 6 mL | COLREA A | 底物液A即用型。 |
1 x 6 mL | COLREA B | 底物液B即用型 |
1 x 12 mL | COLOUR STOP | 終止液即用型,含有:0.35M硫酸 |
2 x | FOIL | 蓋板膜 |
所需材料(未提供)
1. 微量移液器(Multipette Eppendorf或類似設(shè)備,CV <3%)。 體積:10; 20; 100; 100-1000μL
2. 渦街攪拌機
3. 軌道搖床(500 rpm)
4. 8通道微量移液器
5. 洗瓶,自動或半自動微量滴定板清洗系統(tǒng)
6. 能夠讀取450nm吸光度的酶標儀(參考波長600-650nm)
7. 雙蒸水或去離子水
8. 紙巾,吸頭和定時器
9. 聚苯乙烯(PS)或聚丙烯(PP)管用于標準和樣品稀釋
10. + 37°C和+ 25°C孵育箱
儲存條件
HMGB1試劑盒在環(huán)境溫度下運輸,儲存應(yīng)在2-8°C。 遠離熱源或陽光直射。 樣品和制備的試劑的儲存和穩(wěn)定性在相應(yīng)的章節(jié)中有描述。開封的微量滴定板條在試劑盒的有效期限內(nèi)保持穩(wěn)定,但應(yīng)在密封的袋子中儲存在2-8°C。
HMGB1試劑盒檢測步驟
1 | 分別加入100ul稀釋液到相應(yīng)的板孔中。 |
2 | 分別加入10ul稀釋液到板中的空白孔。 |
3 | 分別加入10ul標準品,陽性質(zhì)控及血清或血漿樣本到相應(yīng)的孔中,短暫搖動30s。 |
4 | 用蓋板膜蓋板,在+37℃溫育20-24h。 |
5 | 移去蓋板膜,棄去溶液,用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次,用吸水紙拍干多余的液體。 |
6 | 每孔加入100ul酶標記物。 |
7 | 蓋板膜蓋板,+25℃溫育2 h。 |
8 | 移去蓋板膜,棄去溶液,用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次,用吸水紙拍干多余的液體。 |
9 | 為了添加顯色液和終止液,如果有的話,可以使用8通道微量移液器。移液應(yīng)在底物液和終止液加液時的相同時間間隔內(nèi)進行。使用正位移并避免形成氣泡 |
10 | 每孔 加入100ul顯色液。 |
11 | 室溫(18-25°C)孵育30min。 |
12 | 每孔加入100ul終止液終止反應(yīng),將內(nèi)容物輕輕混合搖勻。 |
13 | 清理板孔背面。 小心不要劃傷板孔,因為這可能會干擾測量。 |
14 | 60min內(nèi)在450nm(參考波長600-650nm)處讀取吸光度值。 |
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更新時間:2024/10/12 16:42:09
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