人環(huán)氧合酶酶免試驗(yàn)
（日本IBL 27186）
簡(jiǎn)介
COX是一種膜結(jié)合酶，負(fù)責(zé)花生烯酸氧化生成前列腺素G2（PGG2）以及隨后PGG2轉(zhuǎn)變?yōu)镻HG2。這是各種前列腺素生成的步。COX至少有兩種不同的亞型，組成表達(dá)型COX-1，和誘導(dǎo)型COX-2。COX-1行使著看家功能，如血管止血，腎流血量，腎小球功能維護(hù)。COX-2存在于部分細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出炎癥信號(hào)，如生長(zhǎng)因子，細(xì)胞因子和內(nèi)毒素。
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用夾心酶免法，采用了兩種高特異性抗體，TMB作為著色劑，*終溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中COX-2的量成正比
檢測(cè)范圍
1.09~70ng/mL
預(yù)期用途
1. 試劑盒可用于細(xì)胞上清裂解液中人COX-2的檢測(cè)
細(xì)胞培養(yǎng)液
1） 將細(xì)胞培養(yǎng)液（1x105~1x107個(gè)細(xì)胞）加入至0.5ml的IBL裂解液中（貨號(hào)為#19022）
2） 在振蕩器上混勻或用移液槍吹打混勻
3） 2-8℃下旋轉(zhuǎn)30min使其溶解
4） 2-8℃，10000rpm下離心10min
5） 有必要的話用EIA緩沖液稀釋上清液
2. 細(xì)胞裂解液試驗(yàn)中，建議所用細(xì)胞數(shù)應(yīng)一致
3. 建議總蛋白濃度液同時(shí)檢測(cè)，可檢測(cè)到人COX-2與總蛋白的關(guān)系
試劑盒組成
1. 微孔板，96孔，包被有抗人COX-2鼠IgG單抗
2. 酶標(biāo)抗體濃縮液，30X，HRP標(biāo)記的抗COX-2兔IgG Fab片段,0.4ml
3. 標(biāo)準(zhǔn)品，重組人COX-2，0.5mlx2
4. EIA緩沖液，30ml
5. 酶標(biāo)抗體稀釋液，內(nèi)含的1%BSA、0.05%的吐溫20的PBS緩沖液，12ml
6. 顯色劑，TMB，15ml
7. 終止液，1N硫酸，12ml
8. 洗滌緩沖濃縮液，50ml，40X，0.05%吐溫20的磷酸緩沖液
操作指南
實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 微量移液器和取樣吸頭
3. 帶刻度的量筒與燒杯
4. 蒸餾水
5. 溫育器（37℃±1℃）
6. 冷床箱（4℃）
7. 坐標(biāo)紙（log/log）
8. 吸水紙
9. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的試管
10. 洗滌瓶
11. 酶標(biāo)抗體稀釋的一次性試管
特別注意
1. 樣品采集后應(yīng)立即檢測(cè)，如需貯存的，則應(yīng)放置在冰凍條件下，避免反復(fù)凍融，檢測(cè)前應(yīng)在低溫下將其溶解并完全混合
2. 如有需要，樣品可用EIA緩沖液稀釋
3. 建議試驗(yàn)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做雙份檢測(cè)
4. 試驗(yàn)樣品應(yīng)在中性PH范圍內(nèi)，有機(jī)溶劑的污染會(huì)影響試驗(yàn)
5. 只能使用試劑盒內(nèi)提供的洗滌液洗板，洗板不充足可能會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)失敗
6. 徹底倒去洗滌液，吸水紙上拍干，不能用吸水紙擦拭微孔
7. 底物液應(yīng)避光保存，因其對(duì)光敏感，且要避免接觸金屬
8. 加入終止液后30min內(nèi)讀數(shù)
更新時(shí)間：2024/10/11 16:13:03
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