大鼠瘦素酶免試驗試劑盒
（日本IBL 27295）
簡介
1950年發(fā)現(xiàn)隱性肥胖基因突變導(dǎo)致肥胖，且與二型糖尿病綜合征的病態(tài)肥胖類似。1994年在洛克菲勒大學(xué)Freidman團隊發(fā)現(xiàn)肥胖基因編碼形成瘦素。瘦素是由肥胖基因產(chǎn)生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪組織產(chǎn)生瘦素并釋放至血液中，隨著脂肪的累積，血液中瘦素的水平含量也呈增長趨勢。瘦素作為lipostat，隨著脂肪組織內(nèi)脂肪的沉積而增加；它還可作為一激素，指令大腦終止食物的消化和增加活動；還證明了可用于標(biāo)記和控制青春期的開始；另外，近期研究表明，瘦素可通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制骨形成。
實驗原理
此試劑盒是一種夾心法的ELISA試劑盒，使用了兩種高特異性的抗體。TMB作為顯色劑，*終溶液所顯示的顏色強度與樣品中瘦素的量成正比
檢測范圍
56.25~3600pg/mL
預(yù)期用途
此試劑盒用于大鼠血清，EDTA-血漿和細(xì)胞上清中瘦素的定量檢測
試劑盒組成
1. 微孔板，96T，包被有抗大鼠瘦素兔子IgG抗體，親和純化
2. 標(biāo)記抗體濃縮，30X，0.4ml，HRP標(biāo)記的抗大鼠瘦素兔IgG Fab片段
3. 標(biāo)準(zhǔn)品，0.5ml，2支，大鼠瘦素
4. EIA緩沖液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
5. 標(biāo)記抗體稀釋液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS
6. 著色劑，TMB，15ml
7. 終止液，1N硫酸，12ml
8. 洗滌緩沖濃縮液，40X，50ml，0.005%吐溫20的磷酸緩沖液
準(zhǔn)備步驟
試驗所需材料但試劑盒未提供
特別注意
1. 試驗樣品采集后應(yīng)立即檢測或是凍存，凍存的樣品避免反復(fù)凍融，檢測前應(yīng)在低溫下先將其完全溶解混勻
2. 試驗樣品用EIA緩沖液稀釋
3. 試驗樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)做雙份檢測
4. 試驗樣品應(yīng)在中性PH范圍，有機溶劑的污染可能會影響檢測
5. 只能用試劑盒提供的洗滌液洗板，否則會導(dǎo)致試驗失敗
6. 吸水紙上拍干微孔板，不能擦拭
7. TMB底物液應(yīng)貯存于黑暗處，因其對光敏感，且避免接觸金屬
8. 加入終止液后30min內(nèi)必須酶標(biāo)儀讀數(shù)
結(jié)果計算
繪制曲線前，所有的數(shù)據(jù)都應(yīng)減去試驗樣品空白值，包括標(biāo)準(zhǔn)品和未知的樣品。以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值和濃度在對數(shù)-對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可直接讀取未知樣品的濃度
附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果
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