小鼠骨橋蛋白ELISA檢測試劑盒
日本IBL (編號:27351)
前言簡介
骨橋蛋白*初是由骨分離出的一種分泌糖蛋白.目前,已知它是由多種細胞(包括成骨細胞, 腎小管細胞, 巨噬細胞,激活T細胞, 血管平滑肌細胞)分泌的一種強酸性鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白.據(jù)報道,它的分子量約為44 kDa -66 kDa ,具體取決于糖基化程度和磷酸化程度.
骨橋蛋白有一個重要的特征,它含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 氨基酸序列. 這種序列廣泛存在于纖連蛋白, 玻連蛋白和多種細胞外蛋白,如αvβ3
骨橋蛋白還有另外一個重要的特征,由于RNA拼接, 糖基化, 磷酸化作用, 硫酸鹽化作用和蛋白酶敏感性等, 使體內(nèi)多種分子都含有骨橋蛋白. 在損傷,發(fā)炎, 血管生成,腫瘤組織等部位, 骨橋蛋白和凝血酶都很有可能同時存在. 骨橋蛋白易受解蛋白片段的影響,并發(fā)揮重要生理作用. 有報道證明, 經(jīng)凝血酶處理能增強骨橋蛋白細胞的粘附活性,這表明用凝血酶裂解骨橋蛋白后,能暴露隱藏的粘附序列.*近有證據(jù)表明骨橋蛋白的氨基末端片段包含有能識別α9β1整合素的隱藏結(jié)合位點.而且,骨橋蛋白含有多細胞結(jié)合位點并能與多種受體發(fā)生交互作用. 這些交互作用能明顯發(fā)揮特定的功能.
原理
此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠骨橋蛋白的量成正比.
檢測范圍
1 - 64 ng/mL (15.4 – 985 pmol/L)
預(yù)期用途
■此IBL試劑盒能用于小鼠EDTA血漿,尿液,細胞上清中骨橋蛋白的定量檢測.
注意實驗前,將樣品凍存于–80°C,因為骨橋蛋白分子非常不穩(wěn)定
■建議小鼠EDTA血漿樣品用PBS稀釋100-6400倍. 如果稀釋100-6400倍,樣品濃度仍超過標準品,請進一步稀釋后再進行試驗.
■用血清和肝素血漿檢測的樣品的值不能反映真實的濃度, 因為骨橋蛋白不穩(wěn)定,易受凝血酶裂解. 并且骨橋蛋白分子有幾分肝素結(jié)合位點, 所以肝素血漿樣品的試驗結(jié)果會受到影響.
■建議尿液樣品的稀釋倍數(shù)超過2000-64000, 但*優(yōu)稀釋倍數(shù)應(yīng)視每個實驗室具體優(yōu)化而定. 由于尿液樣品易于分解,建議加入蛋白酶抑制劑(PMSF).而且, 如果樣品提取后不能立即檢測,請凍存于-80°C或更低. 注意, 反復(fù)凍融后樣品的檢測結(jié)果會低于真實值,所以應(yīng)小心處理.
■細胞上清的稀釋倍數(shù)隨所選取的細胞不同而不同, 具體稀釋倍數(shù)請按每個實驗室優(yōu)化而定.
■ 試劑盒不能檢測凝血酶裂解的骨橋蛋白.
■ 試劑盒能檢測 重組或天然的小鼠骨橋蛋白.
試劑盒成分
1 預(yù)包被板: 抗小鼠骨橋蛋白(O-17)兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標記抗體:
(30倍濃縮)HRP標記抗小鼠骨橋蛋白(O-165)兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標準品: 重組小鼠骨橋蛋白 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS30mL x 1
5 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸12mL x 1
8 濃縮洗滌液:
(40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1
操作說明
1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供)
酶標儀(450nm) 微移液管及其槍頭
量筒及燒杯 去離子水
溫育箱(37°C ± 1°C) 冰箱(4°C)
坐標紙(log/log) 吸水紙
試管(用于標準品稀釋) 洗瓶 (用于洗板)
一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)
更新時間：2024/10/11 16:13:03
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