大鼠骨橋蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒

日本IBL   (編號(hào):27360)

言簡(jiǎn)介

骨橋蛋白初是由骨分離出的一種分泌糖蛋白.目,已知它是由多種細(xì)胞(包括成骨細(xì)胞, 腎小管細(xì)胞, 巨噬細(xì)胞,激活T細(xì)胞, 血管平滑肌細(xì)胞)分泌的一種強(qiáng)酸性鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白.據(jù)報(bào)道,它的分子量約為44 kDa -66 kDa ,具體取決于糖基化程度和磷酸化程度.

骨橋蛋白有一個(gè)重要的特征,它含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 氨基酸序列.這種序列廣泛存在于纖連蛋白, 玻連蛋白和多種細(xì)胞外蛋白,如αvβ3

骨橋蛋白還有另外一個(gè)重要的特征,由于RNA拼接, 糖基化, 磷酸化作用, 硫酸鹽化作用和蛋白酶敏感性等,使體內(nèi)多種分子都含有骨橋蛋白.在損傷,發(fā)炎, 血管生成,腫瘤組織等部位,骨橋蛋白和凝血酶都很有可能同時(shí)存在.骨橋蛋白易受解蛋白片段的影響,并發(fā)揮重要生理作用.有報(bào)道證明,經(jīng)凝血酶處理能增強(qiáng)骨橋蛋白細(xì)胞的粘附活性,這表明用凝血酶裂解骨橋蛋白后,能暴露隱藏的粘附序列.近有證據(jù)表明骨橋蛋白的氨基末端片段包含有能識(shí)別α9β1整合素的隱藏結(jié)合位點(diǎn).而且,骨橋蛋白含有多細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)并能與多種受體發(fā)生交互作用.這些交互作用能明顯發(fā)揮特定的功能.

原理

大鼠試劑盒骨橋蛋白ELISA法27360運(yùn)用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強(qiáng)度與大鼠骨橋蛋白的量成正比.

檢測(cè)范圍

0.07 - 4.75 ng/mL

預(yù)期用途

■此大鼠試劑盒骨橋蛋白ELISA法27360能用于大鼠EDTA血漿,尿液,細(xì)胞上清中骨橋蛋白的體外定量檢測(cè).注意實(shí)驗(yàn),將樣品凍存于–80°C,因?yàn)楣菢虻鞍追肿臃浅２环�(wěn)定

■建議大鼠EDTA血漿樣品用PBS稀釋大于10倍. 如果稀釋10倍,樣品濃度仍超過(guò)高標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)進(jìn)一步稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn).

■用血清和肝素血漿檢測(cè)樣品的值不理想, 因?yàn)楣菢虻鞍撞环�(wěn)定,易受凝血酶裂解. 并且骨橋蛋白分子有幾分肝素結(jié)合位點(diǎn), 因此,檢測(cè)血清樣品會(huì)得到錯(cuò)誤的結(jié)果,而肝素血漿樣品的試驗(yàn)真實(shí)值也會(huì)受到影響.

■尿液樣品的稀釋倍數(shù)隨大鼠的種類不同而不同, 因此稀釋倍數(shù)應(yīng)視每個(gè)實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化情況而定. 在一些大鼠種類, 由于尿液樣品中沒(méi)有全長(zhǎng)的骨橋蛋白分子,所以不能用elisa試劑盒檢測(cè), 由于骨橋蛋白易降解,建議加入蛋白酶抑制劑(如PMSF).而且, 如果樣品提取后不能立即檢測(cè),請(qǐng)凍存于-80°C或更低. 注意, 反復(fù)凍融后樣品的檢測(cè)結(jié)果會(huì)低于真實(shí)值,所以應(yīng)小心處理.

■細(xì)胞上清的稀釋倍數(shù)隨骨橋蛋白的表達(dá)水平不同而不同, 具體稀釋倍數(shù)視每個(gè)實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化而定.

■ 試劑盒不能檢測(cè)凝血酶裂解的骨橋蛋白.

■ 試劑盒能檢測(cè) 重組或天然的大鼠骨橋蛋白.

試劑盒成分

1  預(yù)包被板:    抗大鼠骨橋蛋白(O-17)兔子IgG,親合純化              96T

2  酶標(biāo)記抗體:

 (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗大鼠骨橋蛋白(O-165)兔子IgG,親合純化      0.4mL x 1

3  標(biāo)準(zhǔn)品:           重組大鼠骨橋蛋白                        0.5mL x2      

4  EIA緩沖液:         含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS30mL x 1

5  標(biāo)記抗體稀釋液:       含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS12mL x 1

6  顯色劑:  TMB底物液15mL x 1

7  終止液:  1N硫酸12mL x 1

8  濃縮洗滌液:

 (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                      50mL x 1

操作說(shuō)明

1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒(méi)有提供)

  酶標(biāo)儀(450nm)             微移液管及其槍頭

  量筒及燒杯               去離子水

冰箱(4°C)                 坐標(biāo)紙(log/log)

吸水紙                   試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋)

  溫育箱(37°C ± 1°C)          PBS緩沖液(用于樣品稀釋)

  洗瓶 (用于洗板)

  一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)

更新時(shí)間：2024/10/12 16:42:08