艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)試劑（糞便樣本）

（德國(guó)DRG：EIA-4448）

應(yīng)用范圍

此酶聯(lián)免疫試劑盒僅用于體外檢測(cè)，定性檢測(cè)糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。

簡(jiǎn)介

艱難梭菌是人類(lèi)腸道內(nèi)的正常菌群，如果過(guò)度服用抗生素，艱難梭菌就會(huì)變成致病菌。Hall和 O’Toole在1935年將此菌分類(lèi)到了可產(chǎn)生毒素的菌群中。艱難梭菌的毒素株會(huì)產(chǎn)生兩類(lèi)毒素：毒素A，腸毒素；毒素B，細(xì)胞毒素。直到1970后期，人們發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌與偽膜性腸炎有所關(guān)聯(lián)時(shí)才確定艱難梭菌是致病菌。偽膜性腸炎是一類(lèi)與抗生素相關(guān)聯(lián)的疾病，主要發(fā)生腹瀉和急性粘膜壞死性炎癥，從而形成由纖維蛋白、粘液層、壞死上皮細(xì)胞和白血球構(gòu)成的克隆偽膜性腸炎。

盡管在50%多的無(wú)癥狀克隆嬰兒患者的糞便中發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌毒素，而且還有高濃度的毒素A和毒素B，但是只有少數(shù)會(huì)*終患有PMC（偽膜性腸炎），剩余的都是無(wú)癥狀的。對(duì)于這種現(xiàn)象可能的原因包括：母乳能夠中和毒素A和毒素B，胎兒腸細(xì)胞對(duì)毒素A的敏感度降低，或者是缺乏毒素受體。少數(shù)病例顯示，囊性纖維變性患者對(duì)PMC（偽膜性腸炎）敏感度降低。診斷抗生素與結(jié)腸炎相關(guān)的*普遍的臨床方法是細(xì)胞培養(yǎng)和乳膠凝集試驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)毒素B對(duì)細(xì)胞的一個(gè)影響作用，這個(gè)試驗(yàn)的敏感度很高（50pg/ml毒素B），但是*少也要2天才可以完成。乳膠凝集是一種可以通過(guò)糞便來(lái)篩查出與艱難梭菌相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)的方法，即使交叉反應(yīng)和不會(huì)產(chǎn)生毒素的艱難梭菌也會(huì)被檢測(cè)出來(lái)。

很多研究者已表明酶聯(lián)免疫法可以檢測(cè)出1-10ng/ml的毒素A或是毒素B。

ELISA試劑盒檢測(cè)原理

檢測(cè)糞便中的艱難梭菌毒素A+B抗原利用的是夾心法。

糞便或者細(xì)胞上清液中的艱難梭菌和陽(yáng)性質(zhì)控與包被孔中的單克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，溫育后，未連接的成分被洗滌除去。

然后在第二次溫育中連接到包被孔的毒素會(huì)特異性地與生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，未連接的材料會(huì)被洗滌除去。

在下一步的溫育中，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素會(huì)與生物素化的抗體反應(yīng)，經(jīng)洗滌步驟除去未連接酶聯(lián)物。

然后加入底物顯色液TMB，顯藍(lán)色，加入終止液終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色變成了黃色。在酶標(biāo)儀上讀取吸光度，吸光度直接與艱難梭菌毒素A和B的量成正比例。

經(jīng)與臨界值比較，可以判定結(jié)果為陽(yáng)性或者陰性。

樣本的制備和保存

1、檢測(cè)糞便樣本：

糞便樣本收集后立即保存在2-8℃，并在72小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

可保存在-20℃，并應(yīng)避免反復(fù)凍融。

如有需要可以保存在-80℃。

用福爾馬林保存的樣本，不能在該實(shí)驗(yàn)中使用。

若糞便樣本已經(jīng)使用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋的，可保存在2-8℃過(guò)夜，然后在第二天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

制備：

使樣本平衡至室溫，并混勻。

移取1000ul的樣本稀釋液至一支干凈試管中。

使用一根一次性的取樣棒，如果是固體，則移取200mg的糞便樣本，如果是液體就取200ul，然后加入到上述試管中并完全懸浮。

如果需要可以在微型離心機(jī)上速度旋轉(zhuǎn)1分鐘。

2、檢測(cè)細(xì)胞上清液：

將艱難梭菌放置血液或者選擇性瓊脂上（例如CCFA）培養(yǎng)，在缺氧環(huán)境下，培養(yǎng)48小時(shí)，則可直接進(jìn)行該ELISA實(shí)驗(yàn)。

移取1000ul的樣本稀釋液至一支干凈試管中。

使用接種環(huán)2-4次，轉(zhuǎn)移艱難梭菌培養(yǎng)液至樣本稀釋液中，并在混合器中全部懸浮。ELISA實(shí)驗(yàn)使用該溶液100ul。

了解更多產(chǎn)品信息，請(qǐng)?jiān)谄脚_(tái)上給我們留言或者關(guān)注“科潤(rùn)達(dá)生物”，關(guān)注我們公眾號(hào)，可以向技術(shù)客服索取免費(fèi)的技術(shù)資料哦！

更新時(shí)間：2024/10/11 16:13:03