(日本IBL 27417)
簡介
人硫氧還蛋白由105個(gè)氨基酸組成,分子量為120道爾頓的蛋白,通過活性位點(diǎn)上兩個(gè)鄰近的半胱氨酸反應(yīng)來調(diào)節(jié)體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)狀態(tài)。
眾所周知,硫氧還蛋白是因應(yīng)激誘導(dǎo)產(chǎn)生的,如紫外線,輻射,氧化劑和病毒感染,并作為一個(gè)生化防御因子抵抗應(yīng)激力,且有抗氧化作用和調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子和轉(zhuǎn)錄因子的活性。
因此,檢測硫氧還蛋白不僅可以檢測體內(nèi)應(yīng)激狀態(tài),還可提高抗逆性研究的進(jìn)展
實(shí)驗(yàn)原理
此試劑盒根據(jù)酶免法的夾心原理,利用兩種高特異性抗體,TMB作為一種著色劑,顏色的強(qiáng)度與人硫氧還蛋白的量成正比
檢測范圍:3.91—250ng/ml
預(yù)期用途
1. 此試劑盒用于血清,EDTA血漿,尿液和上清中的人硫氧還蛋白的定量檢測
2. 以防上清介質(zhì)中含有FCS,我們建議設(shè)置一中陰性質(zhì)控作為試驗(yàn)樣品空白孔
試劑盒組成
1. 預(yù)包被板,96孔,抗人硫氧還蛋白小鼠IgG單抗親和純化
2. 標(biāo)記抗體濃縮液,0.4mlx1,,30X,HRP標(biāo)記抗人硫氧還蛋白兔IgGFab’親和純化
3. 標(biāo)準(zhǔn)品,1.0mlx2,重組人硫氧還蛋白
4. EIA緩沖液,30mlx1,1%BSA,含0.05%吐溫20的PBS
5. 標(biāo)記抗體稀釋液,12mlx1,1%BSA,含0.05%吐溫20的PBS
6. 著色劑,15mlx1,TMB底物液
7. 終止液,12mlx1,1N硫酸
8. 洗滌緩沖濃縮液,50mlx1,40X,含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液
實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
1. 酶標(biāo)儀
2. 移液器和槍頭
3. 燒杯
4. 去離子水
5. 吸水紙
6. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的試管
7. 洗瓶
8. 一次性試驗(yàn)管
試劑準(zhǔn)備
1. 洗滌緩沖液制備:先將洗滌濃縮液平衡至室溫,充分混勻,然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻,即得。配制的洗滌液應(yīng)保存于冰箱內(nèi),并于2周內(nèi)用完
2. 標(biāo)記抗體的制備:用標(biāo)記抗體稀釋液將標(biāo)記抗體稀釋30倍,即得。
如:如果只測一條板,8孔,則需要標(biāo)記抗體800ul(30ul的標(biāo)記抗體+870ul的標(biāo)記抗體稀釋液,混勻,使用時(shí)每孔加100ul)
此步驟在實(shí)驗(yàn)前完成
剩余的標(biāo)記抗體濃縮應(yīng)裝于密封瓶內(nèi),保存在4℃
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備:吸取1.0ml的去離子水至標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi),充分混勻,得到500ng/ml的人硫氧還蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
4. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備8個(gè)試管用于標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋,每管加入230ul的EIA緩沖液
每管的濃度如下
1號(hào)管 250ng/ml
2號(hào)管 125ng/ml
3號(hào)管 62.5ng/ml
4號(hào)管 31.25ng/ml
5號(hào)管 15.63ng/ml
6號(hào)管 7.81ng/ml
7號(hào)管 3.91ng/ml
8號(hào)管 0ng/ml(試驗(yàn)樣品空白)
吸取230ul的標(biāo)準(zhǔn)品于1號(hào)管混勻,然后從1號(hào)管吸取230ul加入2號(hào)管,依次連續(xù)稀釋,標(biāo)準(zhǔn)品范圍為250~3.91ng/ml
5. 樣品稀釋:樣品用EIA緩沖液稀釋。如果樣品濃度事先沒有建立,我們建議,先用幾個(gè)不同稀釋比例的樣品進(jìn)行檢測,來確定樣品*佳稀釋比例
更新時(shí)間:2024/10/12 16:42:08
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