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艱難梭菌毒素A+B檢測(cè)試劑盒(糞便和培養(yǎng)懸浮液)
問(wèn):如何設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照和臨界對(duì)照,結(jié)果又如何判定?
答:一般陰陽(yáng)性對(duì)照品設(shè)置一孔,臨界對(duì)照設(shè)復(fù)孔,結(jié)果計(jì)算時(shí)求臨界OD的平均值高于臨界對(duì)照平均值的為陽(yáng)性,反之為陰性。
通用名稱:艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)
英文名稱:C. difficile toxin A+B antigen detection
公司品牌:德國(guó)DRG
儲(chǔ)存條件:2-8℃
檢測(cè)方法:ELISA方法
預(yù)期用途:用于定性檢測(cè)糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
參考價(jià)格:詢價(jià)
產(chǎn)品貨號(hào):EIA-4448
產(chǎn)品規(guī)格:96T
檢測(cè)樣本:糞便、細(xì)胞上清液
供應(yīng)商家:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
試劑盒檢測(cè)預(yù)期用途
艱難梭菌毒素A+B檢測(cè)試劑盒(糞便和培養(yǎng)懸浮液)僅用于體外檢測(cè),定性檢測(cè)糞便和培養(yǎng)懸浮液中的艱難梭菌毒素A+B毒素。
艱難梭菌簡(jiǎn)介
艱難梭菌是人類腸道內(nèi)的正常菌群,如果過(guò)度服用抗生素,艱難梭菌就會(huì)變成致病菌。Hall 和 O’Toole在1935年將此菌分類到了可產(chǎn)生毒素的菌群中。艱難梭菌的毒素株會(huì)產(chǎn)生兩類毒素:毒素A,腸毒素;毒素B,細(xì)胞毒素。直到1970后期,人們發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌與偽膜性腸炎有所關(guān)聯(lián)時(shí)才確定艱難梭菌是致病菌。偽膜性腸炎是一類與抗生素相關(guān)聯(lián)的疾病,主要發(fā)生腹瀉和急性粘膜壞死性炎癥,從而形成由纖維蛋白、粘液層、壞死上皮細(xì)胞和白血球構(gòu)成的克隆偽膜性腸炎。
盡管在50%多的無(wú)癥狀克隆嬰兒患者的糞便中發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌毒素,而且還有高濃度的毒素A和毒素B,但是只有少數(shù)會(huì)*終患有PMC(偽膜性腸炎),剩余的都是無(wú)癥狀的。對(duì)于這種現(xiàn)象可能的原因包括:母乳能夠中和毒素A和毒素B,胎兒腸細(xì)胞對(duì)毒素A的敏感度降低,或者是缺乏毒素受體。少數(shù)病例顯示,囊性纖維變性患者對(duì)PMC(偽膜性腸炎)敏感度降低。診斷抗生素與結(jié)腸炎相關(guān)的*普遍的臨床方法是細(xì)胞培養(yǎng)和乳膠凝集試驗(yàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)毒素B對(duì)細(xì)胞的一個(gè)影響作用,這個(gè)試驗(yàn)的敏感度很高(50pg/ml毒素B),但是*少也要2天才可以完成。乳膠凝集是一種可以通過(guò)糞便來(lái)篩查出與艱難梭菌相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)的方法,即使交叉反應(yīng)和不會(huì)產(chǎn)生毒素的艱難梭菌也會(huì)被檢測(cè)出來(lái)。很多研究者已表明酶聯(lián)免疫法可以檢測(cè)出1-10ng/ml的毒素A或是毒素B。
試劑盒檢測(cè)原理
檢測(cè)糞便中的艱難梭菌毒素A+B抗原利用的是夾心法。糞便或者細(xì)胞上清液中的艱難梭菌和陽(yáng)性質(zhì)控與包被孔中的單克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng),溫育后,未連接的成分被洗滌除去。然后在第二次溫育中連接到包被孔的毒素會(huì)特異性地與生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng),未連接的材料會(huì)被洗滌除去。
在下一步的溫育中,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素會(huì)與生物素化的抗體反應(yīng),經(jīng)洗滌步驟除去未連接酶聯(lián)物。然后加入底物顯色液TMB,顯藍(lán)色,加入終止液終止反應(yīng),溶液由藍(lán)色變成了黃色。在酶標(biāo)儀上讀取吸光度,吸光度直接與艱難梭菌毒素A和B的量成正比例。經(jīng)與臨界值比較,可以判定結(jié)果為陽(yáng)性或者陰性。
試劑盒組成
名稱 | 描述 | 標(biāo)志 |
反應(yīng)板 | 含有抗艱難梭菌毒素A+B抗體的96孔板 | MT PLATE |
濃縮洗滌液 (10X) | 100 ml濃縮緩沖液(10倍濃縮),可稀釋至1000ml。白蓋 | WASH BUF |
樣本稀釋液 | 100ml,即用,紅色,黑蓋 | DIL |
陽(yáng)性質(zhì)控品 | 2 ml 艱難梭菌陽(yáng)性樣本,即用,藍(lán)色,黑蓋 | CONTROL + |
陰性質(zhì)控品 | 2ml 艱難梭菌陰性樣本,即用,藍(lán)色,綠蓋 | CONTROL – |
生物素化的抗體 | 生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體(兔) 15 ml,即用,綠色,白蓋 | CONJ BIOTIN |
酶聯(lián)物 | 15ml鏈霉親和素標(biāo)記的辣根Catalase,即用,紅色,棕色蓋 | CONJ STREPT |
顯色液 | 15 ml TMB顯色和hydrogen peroxide,即用,藍(lán)蓋 | SUBS TMB |
終止液 | 15 ml 0.25 M流酸,即用,黃蓋 | SOLN |
試劑盒的制備和保存
艱難梭菌毒素A+B檢測(cè)試劑盒(糞便和培養(yǎng)懸浮液)效期見(jiàn)于試劑盒上的標(biāo)簽。收到試劑盒后,應(yīng)放在原始的試劑盒箱子里于2-8℃保存。所有的成分開(kāi)瓶后,在適當(dāng)?shù)谋4鏃l件下,至少可以穩(wěn)定2個(gè)月。稀釋后的洗滌緩沖液在2-8℃,至少可以保存1個(gè)月。
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