ELISA操作結(jié)果判斷過(guò)程常見問題及解答

1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差，或者沒有運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線；質(zhì)控不在控。

2） 出現(xiàn)假陰性結(jié)果或假陽(yáng)性結(jié)果

3） 測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性差

4） 全部板孔不顯色或全部顯色，無(wú)法判斷結(jié)果

解決方法：

1）加樣時(shí)，不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品使用不同槍頭。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過(guò)程要保證量和均勻性。標(biāo)準(zhǔn)品可做復(fù)孔測(cè)定，明顯偏離的標(biāo)準(zhǔn)品可舍去。每次測(cè)試，都要運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確。質(zhì)控品不在質(zhì)控單檢測(cè)范圍內(nèi)時(shí)，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不能報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要重新檢測(cè)。

2）出現(xiàn)假陰性樣本可能是孵育溫度和時(shí)間不足，酶標(biāo)記物加樣量不足，顯色時(shí)間短等原因，讀數(shù)時(shí)終止時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等，應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作要求進(jìn)行；

出現(xiàn)假陽(yáng)性樣本可能是洗滌不充分，酶過(guò)量，類風(fēng)濕因子干擾，樣本溶血，脂血等，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，注意樣本要求，洗板步驟，保證充分洗板，酶標(biāo)記物加樣量要準(zhǔn)確，顯色時(shí)間充分，終止后盡快讀板等。

3）重復(fù)性差可能是加樣本及試劑量不準(zhǔn)，孔間不一致 ；加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染 ；加錯(cuò)樣本 ；加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁 ；不同批號(hào)試劑盒中組分混用 ；溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致等，實(shí)驗(yàn)過(guò)程要注意上述操作。

4）整板不顯色可能是忘記加酶或者試劑失效，酶污染，錯(cuò)加試劑等；整板顯色可能是洗滌液被酶污染，顯色液變質(zhì)，包被板不干凈等；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)注意避免試劑的污染或交叉污染，加樣前認(rèn)真辨別試劑，避免錯(cuò)誤加樣。